MICROSCOPIA

Microscopía (o también sin tilde «microscopia») es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de resolución del ojo normal.
Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo se requiere para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son, técnicas de preparación y manejo de los objetos de estudio, técnicas de salida, procesamiento, interpretación y registro de imágenes, etc.

Exceptuando técnicas especiales como las utilizadas en microscopio de fuerza atómica, microscopio de iones en campo y microscopio de efecto túnel, la microscopía generalmente implica la difracción, reflexión o refracción de algún tipo de radiación incidente en el sujeto de estudio.

Microscopio

El microscopio (del griego μικρός micrós, ‘pequeño’, y σκοπέω scopéo, ‘mirar’) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene dos o más lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.

En 1665 Robert Hooke observó con un microscopio un delgado corte de corcho y notó que el material era poroso, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó células. Se trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más tarde, Marcello Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar al microscopio los capilares sanguíneos, y Robert Hooke publicó su obra Micrographia.

Figura 1. Partes del microscopio

  -OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

 - El TUBO Óptico se puede acercar o alejar de la preparación mediante un TORNILLO MACROMÉTRICO o de grandes movimientos que sirve para realizar un primer enfoque.

 -REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. La esfera se suele llamar CABEZAL Y contiene los sistemas de lentes oculares (monoculares o binoculares (2 lentes)).

 - BRAZO : Es una pieza metálica de forma curvada que puede girar; sostiene por su extremo superior al Tubo Óptico y en el inferior lleva varias piezas importantes.

  -PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

  -OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

  - PINZAS DE SUJECIÓN.- Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y  transversal de la preparación. 

 -CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. El condensador de la parte de abajo también se llama FOCO y es el que dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

 -TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.

 - BASE. Sujeción de todo el microscopio.

   Sobre la PLATINA se coloca la preparación que se va a observar  con un Orificio central por el que pasa la Luz procedente del Espejo. El ESPEJO con una cara plana y otra cóncava, está montado sobre un eje giratorio ubicado en la zona más inferior del brazo por debajo de la Platina.

Reglas Generales Para El Cuidado Del Microscopio

1. Traslado. Se toma con la mano derecha el brazo del microscopio y con la mano izquierda la base.
2. El cordón se deberá enrollar sobre sí mismo, no alrededor del cuerpo del microscopio.
3. El microscopio se encenderá hasta que comience la observación.
4. Ya encendido, no se apagará constantemente, sino hasta finalizar la observación de todas las muestras que se indiquen en la práctica, mientras no se observe, se disminuirá la intensidad luminosa.
5. Mientras permanezca encendido se evitará realizar cualquier movimiento brusco.
6. Se evitará manejarlo con las manos húmedas o mojadas.
7. Cuando no se esté observando, deberá eliminarse la lente ocular con el objeto de menor aumento.
8. El sistema óptico y de iluminación nunca deberá ser tocado con los dedos.
9. No se deberán colocar los portaobjetos mojados sobre la platina.
10. Después de usar el lente de inmersión se deberá limpiar con un paño suave o con un papel higiénico.
11. En las preparaciones en fresco siempre deberá cubrirse con cubreobjetos.

Manejo Y Uso Del Microscopio

1. Colocar el microscopio en una mesa que permita una cómoda observación a través del ocular.
2. Limpiar el sistema óptico y el de iluminación.
3. Subir el condensador hasta el tope y cerrar el diafragma iris, aproximadamente a la mitad.
4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento (10 X).
Bajar la platina y colocar la preparación (fijarse que quede firmemente sujeta al carro, y que el cubre objetos y el objeto estén situados hacia arriba) acomodando la porción de la preparación que se va examinar en la apertura.
5. Mirando por los extremos subir la platina hasta el tope, si no hay tope acercar la platina lo más cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levemente sobre la preparación. Normalmente los microscopios convencionales poseen un tope que impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo, puede darse el caso que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lente objetiva de 10X).
6. Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macrométrico, hasta que empiecen a distinguirse los detalles de la preparación.
7. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micrométrico.
8. Ajustar la distancia interpupilar (distancia entre los ojos).
9. Ajustar dioptrías (agudeza visual) en la porta ocular izquierda, o bien con el ocular enfocarle izquierdo.
10. Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparación, a fin de ir reconociendo imágenes que le sean familiares. recordar que el objetivo de 10X permite ver la visión panorámica del preparado. Es decir, los tejidos, su ubicación, y sus relaciones (función importante al inicio del estudio que ahorrará tiempo dedicado al análisis de la muestra).
11. Cambiar a un objetivo de más aumento (sin bajar la platina con el tornillo macrométrico) y enfocar únicamente con el tornillo micrométrico.
12. Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gota de aceite de inmersión en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina) en el punto de mayor concentración luminosa, acerque la lente de 100X lentamente hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observar lateralmente éste movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente el tornillo micrométrico hasta encontrar la imagen.
13. Recordar que los objetivos de 40X y 100X, permiten ver detalles de una célula, o la conformación celular de una estructura. Se puede observar la forma y tamaño de células o grupo de ellas, aspecto que permite analizar la muestra de manera eficiente.
14. Al finalizar su observación, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes objetivas y la platina. Si al llevar a cabo el proceso no enfoco con la lente objetiva de 10X o la lente objetiva de 40X.

Checar los siguientes aspectos:

A. No enfoco con la lente objetiva de 10X.

• Ver si la iluminación es correcta Una mala iluminación puede hacer que el punto máximo de enfoque se vea poco nítido, dándonos la falsa impresión de un problema en el sistema de lentes.

La búsqueda de la mejor iluminación o la apertura del diafragma resolverán el problema.

 Limpiar el ocular. Muchas veces ocurre que la inexperta (y comprensible) manipulación del microscopio, hace que uno toque el ocular con los dedos, dejando la impronta de las huellas digitales. La simple limpieza del ocular puede resolver el problema (error muy frecuente cuando no se observa una imagen).
 Acomodar correctamente el revólver. Generalmente los revólveres de cualquier microscopio tienen una traba para cada objetivo. Acomodarlo incorrectamente, o no trabarlo en su punto exacto,puede desalinear el objetivo del ocular, impidiéndonos una correcta apreciación de la muestra. Al acomodar el revólver correctamente, alineará al objetivo 10X con el ocular, y permitirá ver correctamente.
 Limpiar el cubreobjetos. Al acomodar la preparación en la platina, muchas veces apoyamos nuestros dedos sobre el cubreobjetos. La simple limpieza garantizará la resolución.

B. No enfoco con la lente objetiva de 40X.

 Fijarse en las características del cubreobjetos. El cubre-objeto está colocado hacia el objetivo, un error tan simple se comete diariamente. Por eso es necesario garantizar, antes de acomodar la preparación en la platina, que el cubreobjetos esté colocado hacia arriba. Su incorrecta acomodación nos permitirá ver la preparación en 10X, pero será imposible su observación en 40X. Checar el grosor del cubre objetos si este es demasiado grueso impide cualquier enfoque o es de mala calidad.
 Fijarse el estado del objetivo de 40X.La gran mayoría de los objetivos 40X, presenta un sistema de resorte en su lente inferior (el que se encuentra cercano a la preparación), a fin de evitar la rotura del cubreobjetos. Sin embargo, muchas veces dicho resorte no funciona correctamente, desacomodando de esta manera los lentes que conforman al objetivo al quedar trabado en un tramo de su recorrido. En estos casos es conveniente avisar al personal del laboratorio, debido a que la manipulación errónea se podría transformar en un error irreparable.
 Fijarse si se está utilizando el objetivo correcto. Los microscopios presentan a la par de los dos objetivos convencionales (10X y 40X),
un tercer objetivo llamado de inmersión (100X). Este objetivo utiliza como fundamento el uso de un aceite especial (aceite de inmersión) interpuesto entre dicho objetivo y el cubre objeto. De esta manera, se altera el índice de difracción del medio interpuesto entre el preparado y el objetivo, y por simple fórmula de límite de resolución, se consigue un mayor aumento. Puede darse el caso que erróneamente hayamos acomodado el objetivo de inmersión en lugar del objetivo 40X, imposibilitando la visión correcta al microscopio. En las lentes objetivas de 100X las causas de no observación de la imagen son las mismas que para el de 40X, la diferencia es que siempre usan aceite de inmersión
.
Uso del sistema de medición

a. Checar el sistema óptico, de iluminación y mecánico del microscopio.
b. Confirmar que el sistema óptico se encuentre limpia.
c. Revisar el sistema eléctrico del instrumento (clavijas en buenas condiciones).
d. Seguir las instrucciones para el enfoque de la muestra.
e. Terminado el trabajo apagar el microscopio, limpiar su sistema óptico y entregarlo al encargado del laboratorio.

Confiabilidad Analítica:

1) Lo más conveniente es dejar fijo el microscopio en la mesa de trabajo
cubierto con una funda para evitar el polvo cuando no se utiliza o bien
guardarlo en un armario.
2) La mesa que se vaya a utilizar debe ser estable para evitar molestas
vibraciones de la muestra durante el examen, estar alejada de las
ventanas y de preferencia ser de fondo negro.3) Mantener el microscopio por lo menos 15 cm del borde de la mesa de
laboratorio.
4) La posición ante el microscopio debe ser cómoda y estar a una altura
correcta.
5) Mantener limpio el sistema óptico y el de iluminación (libre de polvo,
aceite, grasa, etc.)
6) Al limpiar las lentes primeramente eliminar las partículas de polvo, ya
sea con un bulbo inyector de aire, un pincel o bien soplando fuertemente
sobre la lente. Posteriormente usar de preferencia papel para lentes
seco, en caso de estar sucios de grasa o aceite usar una mezcla de
alcohol – acetona- éter (80%/10%/10%) y en última instancia con xilol.
Esta limpieza debe de realizarse antes y después de usar el
microscopio.
7) Las partes externas del microscopio se limpian con un lienzo seco, o en
su efecto humedeciendo un algodón con un detergente suave,
posteriormente limpiar con un trapo húmedo, nunca limpiar con alcohol
o acetona.
8) Evitar que las lentes estén en contacto con saliva debido a que al
mezclarse con el polvo forma una capa difícil de remover.
9) Cuando se observe a través del ocular no pegar los ojos a la lente(los
cosméticos las dañan.
10) Evitar que las lentes objetivas se rayen o quiebren al enfocar. Para
realizar el enfoque hay una de operaciones que facilita y acelera el
enfoque y evita al mismo tiempo que se estropee la preparación o el
microscopio la más indicada y sencilla para el enfoque inicial es el usar
el objetivo de 10X, porque la mayoría de los microscopios tienen un tope
que impide que esta lente pegue con el portaobjetos.
11) Al enfocar hacerlo siempre tratando de alejar la lente de la muestra y
nunca en sentido contrario.
12) Nunca deje la lente sumergida en el aceite o en contacto con muestras
líquidas.
13) No quitar las lentes objetivas y oculares de su lugar.
14) No cambiar las lentes objetivas tomándolas con los dedos por su
estructura metálica, ya que el sudor contiene ácidos grasos y otras
sustancias que los dañan, además al moverlos de esta forma los
desajusta.
15) No quitar el condensador, ni tratar de ver si estos tienen diafragma con
el dedo usar siempre en dispositivo provisto por fabricante para hacerlo.
16) Al desconectar los enchufes del microscopio no tirar del alambre, sujetar
firmemente el enchufe y luego desconectarlo de la toma.
17) El estudiante que use anteojos debe quitárselos cuando vaya a observar
al microscopio, excepto el que sufre astigmatismo, o que las lentes
oculares tengan indicaciones de que pueden usarse con gafas, en este
caso evitar el contacto de las lentes oculares con los anteojos pues los
oculares pueden rayarse e inutilizarse.
18) Nunca mueva ninguna parte del microscopio si antes no sabe para que
sirve.
19) Siempre que enfoque primero localice visualmente las partes que va
utilizar y posteriormente proceder a moverlas.
20) El mantenimiento del microscopio debe ser diario, mensual y semestral.

Conclusión:

En toda disciplina científica tenemos una principal importancia no solo en el Método Científico que estemos aplicando, sino también en el Instrumental Científico empleado, siendo un elemento esencial para realizar distintos ensayos y para que otros miembros de la Comunidad Científica puedan repetirlo, por lo que también los Avances Tecnológicos que se realizan también tienen injerencia en los cambios de las distintas teorías o puntos de vista.

Uno de los grandes avances que tuvo el mundo de la ciencia se dio con la llegada del Microscopio Óptico, que consistió en la combinación de al menos Dos Lentes para lograr un aumento más que considerable de lo que estamos observando, llevando nuestra atención a más allá de lo que nuestros ojos pueden apreciar, inclusive con la ayuda de una Lupa de Aumentos, llevando la exploración de nuestro entorno a nuevos mundos.

Esta invención fue el punto de partida de una gran variedad de avances en el mundo de la ciencia, que partieron desde el mundo de la Microscopía y que además cambiaron la forma de ver el mundo, desde la posibilidad de estudiar las Bacterias y Microbios (lo que dio marcha a la Bacteriología) hasta el análisis de nuestra propia sangre con el descubrimiento de los Glóbulos Rojos y Blancos, que supuso un fuerte avance en el mundo de la medicina.

También se aplica la Microscopía a la resolución de conflictos de índole legal, con las distintas disciplinas científicas vinculadas a la Criminalística, que derivan de otras ciencias como lo es la Bioquímica, permitiendo además mayor precisión a la hora de realizar Reacciones Químicas, mejorando notoriamente la precisión a la hora de interpretar resultados.

Actualmente contamos con la Microscopía Electrónica de Barrido que permite conseguir aumentos de más de 100.000X, siendo derivada del instrumental conocido como Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM) que emplea un haz de electrones en lugar de emplear una Fuente Lumínica para lograr el enfoque.